PTEN-PI3K/AKT信号传导途径对胃癌细胞株MKN28凋亡的影响

Effects of PTEN PI3K/AKT pathway on the apoptosis of gastric cancer MKN28 cells

摘要: 目的探讨PTEN-PI3K/AKT信号传导途径对胃癌细胞株MKN28凋亡的调控作用及其机制。方法构建PTEN真核表达载体，转染至胃癌细胞株MKN28中(转染组)；同样方法转染空载体和等量的PBS分别作为阴性对照组和空白对照组，检测对胃癌细胞株MKN28凋亡的影响及对PI3K、AKT、Caspase-3、Caspase-9的影响。MTT检测细胞生长曲线，TUNEL染色法检测细胞凋亡，Western blot检测蛋白的表达。PI3K抑制剂LY294002处理未转染PTEN的胃癌细胞株MKN28(处理组)；对照组加入等量的PBS，抑制PI3K活性后检测细胞凋亡蛋白及凋亡相关蛋白的表达。组间比较采用t检验，时间依赖性检验采用相关分析方法。结果成功构建PTEN真核表达质粒并转染至胃癌细胞株MKN28中，获得稳定过表达PTEN的细胞模型。MTT检测发现转染组胃癌细胞株MKN28生长明显受到抑制，且呈时间依赖性(r=0.938，P<0.05)。转染组平均凋亡率达到27.86%±4.78%，明显高于阴性对照组的0.01%±0.01%(t=9.527，P<0.05)。转染PTEN后，转染组PI3K蛋白表达量为0.25±0.03，明显低于空白对照组的0.93±0.16及阴性对照组的0.96±0.15(t=7.235，8.883，P<0.05)。转染组活化的AKT(P-AKT)蛋白表达量为0.21±0.03，明显低于空白对照组的0.93±0.13